蘿卜硫素對腎小管上皮細胞氧化應激及 Nrf2 /HO -1信號通路的影響
覃正碧1 毛衛林2 ( 湖北民族學院附屬民大醫院 1． 藥學部; 2． 泌尿外科 湖北恩施 445000)

摘 要 目的: 探討蘿卜硫素( SFN) 對腎小管上皮細胞( HK-2) 的氧化應激及核轉錄因子 E2 相關因子 2( Nrf2) /血紅素加氧酶( HO) -1 信號通路的影響。方法: 體外培養 HK-2 細胞，將細胞分為空白對照組、H2O2處理組、H2O2 + 10 μmol·L － 1 SFN 組、H2O2 + 20 μmol·L － 1 SFN 組和 H2 O2 + 40 μmol·L － 1 SFN 組; 測定 HK-2 細胞中丙二醛( MDA) 、一氧化氮( NO) 、谷胱甘肽( GSH) 的含量及超氧化物歧化酶( SOD) 的活性; ＲT-PCＲ 和 Western Blot 法分別檢測 Nrf2 和 HO-1 mＲNA 及蛋白表達水平。結果: 與空白對照組相比，H2O2處理組中 MDA、NO 含量明顯升高，GSH 水平和 SOD 酶活性顯著降低( P ＜ 0． 05) ; 經高、中、低 3種濃度的蘿卜硫素處理后 MDA、NO 含量顯著降低，GSH 水平顯著升高，SOD 酶活性也顯著升高，Nrf2 和 HO-1mＲNA 及蛋白表達明顯上調( P ＜ 0． 05) 。結論: 蘿卜硫素有抗 HK-2 細胞氧化應激損傷的作用，其作用機制可能與激活 Nrf2 /HO-1 信號通路有關。
關鍵詞 蘿卜硫素; 腎小管上皮細胞; 氧化應激; 核轉錄因子 E2 相關因子 2; 血紅素加氧酶
中圖分類號: Ｒ965． 1 文獻標識碼: A 文章編號: 1008-049X( 2017) 05-0809-04蘿卜硫素( sulforaphane，SFN) 又名萊菔硫素，是從蔬菜中發現的植物活性物質，具有良好的抗癌效果，在西藍花、芥藍等十字花科植物中的含量非常豐富，并且是一種多功能的酶誘導物，可誘導Ⅱ型解毒酶的產生而起到抗癌的作用［1 ～ 4］。大量實驗結果表明蘿卜硫素可以在體外抑制多種腫瘤細胞的增殖并誘導其凋亡，但其作用機制目前尚不清楚。在多種病變細胞中均存在氧化應激損傷，而氧化應激是指機體或細胞內氧自由基的產生失衡，或外源性氧化物質攝入過多，導致活性氧在細胞內累積所致的毒性反應。研究還表明氧化應激過程是腫瘤發生、發展的一個重要促進因素。核因子相關因子 2( Nrf2) 屬于堿性亮氨酸拉鏈蛋白家族成員，在抗炎應答元件( AＲE) 介導的抗炎癥抗氧化基因表達中起重要作用［5］。Nrf2 可進入核內，與 AＲE 結合，并參與下游Ⅱ相代謝酶基因的轉錄，其中就包括血紅素加氧酶( HO-1) 。Nrf2-AＲE 通路具有細胞保護的作用，并能通過產生 HO-1 發揮抗炎抗腫瘤的作用。HO-1 屬于熱休克蛋白家族，具有明顯的抗炎抗氧化作用，是血紅素代謝的限速酶［6］。本研究將外源性活性氧過氧化氫( H2O2 ) 作用于腎小管上皮細胞( HK-2) ，探討蘿卜硫素對 HK-2 細胞氧化應激及 Nrf2 /HO-1 信號通路的影響。
1 材料及方法
1． 1 材料
HK-2 細胞株購置于上海科學生物研究所( 從美國 ATCC 細胞庫引進) ，蘿卜硫素( 上海原葉生物有限公司，CAS No． 121-42-3，含量≥99% ) ; ＲPMI1640 培養基( Thermo Scientific 公司，中國北京) ; 胎牛血清( Gibco 公司，批號 20160954) ; 胰蛋白酶( 上海谷歌生物有限公司，批號 C2385) ; 丙二醛( MDA)含量測定試劑盒 、一氧化氮( NO) 含量測定試劑盒、超氧化物歧化酶( SOD) 活性測定試劑盒、谷胱甘肽( GSH) 含量測定試劑盒均購自南京建成生物工程有限公司。CCK8 試劑盒( 上海紀寧實業有限公司，批號 B1549) ; ＲIPA 裂解液( 上海吉諾公司，批號C1478) ; SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒( 上海谷歌生物有限公司，批號 147566) ; BCA 試劑盒( 上海谷歌生物有限公司，批號 P0012S-54) ; BSA 粉末( 武漢谷歌生物有限公司，批號 20160815) ; ＲT-PCＲ 試劑盒( 上海恒遠生物科技有限公司，批號 P0023D-57) ; β-actin、Nrf2、HO-1 一抗均購自美國 Sigma 公司; 二抗羊抗兔 IgG 購自美國 Sigma 公司。
1． 2 儀器
單人超凈臺( 蘇州華新空調凈化有限公司) ; 細胞培養箱( 上海醫用分析儀器廠) ; Victor3 1420 Multilable Counter 酶 標 儀 ( DX540，美 國) ; ＲT-PCＲ 儀( DX200G，日本) ; DYCZ-24DN SDS-PAGE 凝膠電泳( 北京六一儀器廠) ; Odyssey infra-red imaging systemOdyssey 雙色紅外激光成像系統( BIO-ＲAD，美國) 。

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