恒遠生物|菌種保存方法有哪些？

微生物為廣泛分布于自然界中的一群肉眼看不到的微小生物，包括細菌、螺旋體、立克次體、衣原體、支原體、放線菌、真菌、病毒等類，其結構簡單，以單細胞、細胞群體或非細胞狀態(tài)存在，在提供營養(yǎng)物質和適宜環(huán)境的條件下，一般都能獨立生活，迅速生長繁殖。為了避免微生物死亡、污染，保持其原有性狀基本穩(wěn)定，便于研究和使用，需要用到菌種保藏技術。菌種的保存主要是指通過降低細菌新陳代謝的速度, 使細菌的生命活動處于半yongjiu性休眠狀態(tài), 以達到長期保藏的目的以及減少菌種的更新需求來降低實驗生產成本。微生物菌種的保存方法由于微生物種類的不同而略有差距，接下來給大家介紹一些常見的菌種保存的方法：





1.低溫冷凍保藏法




該方法適合大多數需要長期保存的微生物，病毒等。原理為在超低溫環(huán)境下時，微生物代謝活動停止，一般溫度越低效果越好。使用凍存管對菌種進行保存，同時需要保護劑，一般使用甘油、脫脂羊粉或者二甲亞砜等保護劑。講含有菌種的凍存管置于-60~-80℃冰箱中冷凍保存。




2.液體石蠟保藏法




液體石蠟保藏法適用于一些不能分解石蠟的菌類，例如酵母菌、芽孢桿菌屬、青霉屬、曲霉屬等，一些細菌和真菌并不適合用該方法進行保存。液體石蠟法使用液體石蠟覆蓋，微生物代謝被抑制，菌種老化推遲。石蠟法可以防止氧氣進入，使得需氧菌無法繼續(xù)生長，同時若培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，容易導致細菌死亡，石蠟法可防止培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，延長菌種保存時間。無菌條件下將滅菌的液體石蠟注入剛培養(yǎng)好的斜面培養(yǎng)物上，液面高出斜面頂端1cm~2cm，加膠塞并用固體石蠟封口，使菌種與空氣隔絕。將注人石蠟油的菌種斜面直立存放于低溫（4℃~6℃）干燥處或室溫下保存。




3.冷凍干燥保藏法




該方法適合大多數微生物的保存，但不適用于不產孢子的絲狀真菌。冷凍干燥保藏法是在低溫、干燥、缺氧條件下保藏菌種。即在低溫條件下快速地將菌種凍結，使微生物保持完整，然后減壓抽直空使冰升華直至脫水干燥，并在直空狀態(tài)密封隔絕空氣，使微生物代謝活動停止，得以長期保藏。按照一定配方配置保護劑加入安瓿管，然后再加入菌種制備成菌懸液。先將安瓿管進行預凍存至-15~-20℃，然后用冷凍真空干燥機對安瓿管進行干燥，并將安瓿管進行熔封。（低溫避光保存）




4.沙土管保藏法




該方法適合用于產孢類放線菌、芽孢桿菌等的保存，不適合以菌絲發(fā)育為主的真菌和病原性真菌的保藏。使用細沙土創(chuàng)造干燥條件，使那些能夠產生孢子或芽孢的微生物在干燥環(huán)境中的代謝活動減緩，抑制其繁殖速度，且抵抗力強不易死亡。該方法能減少菌株突變，延長存活時間。將河、海沙用60目過篩，棄去大顆粒及雜質，再用80目過篩，去掉細沙。用吸鐵石吸去鐵質，放入容器中用10%鹽酸浸泡，如河沙中右機物較多可用20%鹽酸浸泡。24h后倒去鹽酸，用自來水浸泡數次至中性，將沙子烘于或曬干。另取未被污染的地表以下十壤用100日討篩，自來水洗至中性，烘干。按沙：土=2：1混合均勻，分裝人安瓿管或小試管中，高度為1cm左右，塞好棉塞，121℃高壓滅菌1~1.5h，或常壓間歇滅菌3次、每天每次16。在50℃以下烘干（溫度不宜過高，影響菌種性能），經檢查無微生物生長方可使用。之后制備菌懸液并將菌懸液加入沙土管中。講含有菌懸液的沙土管放入真空干燥器中進行真空干燥。使用火焰封融管口，存放于低溫（4℃~10℃）或常溫干燥處，定期檢查活力及雜菌情況。