ELISA實驗常見問題2022已更新

ELISA實驗原理簡單，步驟少，流程短，試劑盒操作相對簡便，實驗小白也能輕松上手。然而，實驗上手雖快，想要得到可靠的實驗結(jié)果，卻并不那么容易。為了更好地助力科研實驗，恒遠生物在這里將大家關(guān)心的ELISA試劑盒實驗的常見問題整理如下：

一、關(guān)于試劑盒：




1.你們的ELISA試劑盒能檢測什么物種？

目前我們的試劑盒檢測的種屬主要為人、小鼠、大鼠、猴、兔、豬、雞、植物等，種屬齊全。如果試劑盒的命名帶有特定指向（如人），代表專門針對此物種；沒有指明物種，則代表該試劑盒在目前公司產(chǎn)品涉及的種屬（例如人、小鼠、大鼠、猴、兔等）內(nèi)通用；其他特殊種屬的檢測適用性，請聯(lián)系技術(shù)支持確認。




2.96TELISA試劑盒能檢測多少樣本？是否需要做復(fù)孔？

為了保證實驗結(jié)果的準確性，我們建議標準品和樣品都做復(fù)孔，但并不強行要求ELISA實驗一定要做復(fù)孔/3復(fù)孔，客戶可根據(jù)自己的需求設(shè)定復(fù)孔實驗，具體實驗情況可咨詢恒遠生物技術(shù)指導(dǎo)。




3.需檢測的樣品較多，能否減少標曲的孔數(shù)？

為保證結(jié)果的準確度，不建議減少標曲的孔數(shù)，請確保能夠檢測至少6個不同的標準品濃度（含空白孔)。




4.ELISA試劑盒要使用多次，但樣本較多，是否可以只做一次標曲？

雖然ELISA實驗的操作步驟相同，但每次實驗的各種影響因素都會有所變化。所以，每次實驗時，都必須重新繪制標準曲線，以得到更準確可靠的檢測結(jié)果。如果需要做多次實驗，溶解后的高濃度標準品可以分裝保存于-20℃條件下，避免反復(fù)凍融，半個月內(nèi)使用有效。




二、關(guān)于樣本




1.血清血漿樣本應(yīng)該選用哪種真空采血管收集？

血清：不含抗凝劑的采血管/含促凝劑采血管（通常為紅色、黃色、橘色管蓋的采血管）

血漿：含抗凝劑的采血管（通常為綠色、紫色管蓋的采血管）




樣品收集后，若在1周內(nèi)進行檢測，可保存于2-8℃條件下；若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃條件下（1個月內(nèi)檢測）或-80℃條件下（3個月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融。檢測前，應(yīng)緩慢融化冷凍過的樣本，并離心除去凍融過程中產(chǎn)生的沉淀物。




2. 采集時，如何盡可能避免溶血現(xiàn)象？

溶血可由多種理化因素和毒素引起。在體外，機械性強力振蕩、低溫冷凍等誘因均可引起溶血。為避免溶血對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，應(yīng)注意：




（1）靜脈采血時，回抽壓力不宜過大；




（2）一次性采血量不宜過少；




（3）采集的全血不宜激烈振蕩；




（4）離心轉(zhuǎn)速不宜過大；




（5）收集的全血需盡快處理成血清/血漿，全血不能凍融；




（6）若需要麻醉采血，需使用沒有溶血作用的麻醉劑。




3.組織/細胞樣本收集中提到的“反復(fù)凍融"，過程應(yīng)該如何操作？

（1）組織樣本：組織研磨后，將其-80℃放置1h/液氮放置0.5h，再置于30℃水浴鍋中輕微振蕩，使其迅速融化，反復(fù)操作1-2次即可；

（2）細胞樣本：按上述操作步驟，反復(fù)凍融2-3次。若為膜蛋白，可以適當做超聲處理，但需要控制好超聲的溫度、頻率；




4.怎樣判斷我的樣本是否需要稀釋或做其他處理？

試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍，建議實驗前通過相關(guān)文獻預(yù)估樣本中待測物的濃度，并通過預(yù)實驗確定樣本的實際濃度情況。如果是常規(guī)樣本類型，可以咨詢ELISA技術(shù)支持，以獲取樣本的推薦稀釋倍數(shù)，并安排預(yù)實驗檢測；如果樣品中待測物的濃度過高或過低，請對樣本做適當?shù)南♂尰驖饪s；如果樣本中的分析物濃度遠低于試劑盒的檢測限，建議選擇靈敏度更高的試劑盒來檢測。




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