ELISA“花板”原因總結

    所謂“花板”，就是空白、陰陽性對照及室內質控孔結果正常，而標本孔的OD值卻偏高。“花板”現象的出現，往往會給實驗者判讀結果帶來麻煩。



    為了避免“花板”問題的出現，降低檢測的假陽性率，獲得更理想的實驗結果，在檢測過程中應采取下列措施：

    1.在選擇ELISA試劑時，應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便、省時的試劑。

    2.在所有標本進行檢測的過程中，所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態的情況下，步驟均按照各種試劑說明書的要求去做，排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結果的影響。

    3.血液標本應置于室溫下1-2h，使血液凝固收縮，然后離心檢測或讓血液過夜后再檢測。這樣才能使得血液充分收縮，讓標本中的非特異性物質所致的假陽性率降至lowest。

    4.檢測之前，加大離心轉速，盡量延長時間，使血細胞和纖維蛋白充分沉淀，讓血細胞與血清*分離。

    5.加樣時不能加入紅細胞或纖維蛋白，要按照操作說明書去做，否則會影響實驗結果。

    6.對于血清中存在的紅細胞或纖維蛋白原，可以在加樣前離心時得到控制，同樣也可以通過適當增加洗滌次數和浸泡時間來進一步減輕或避免對實驗結果的影響。同樣，對于血液存在的非特異性的IgG，增加洗滌次數和延長浸泡時間也同樣有效。

    7.封板溫育時，各孔一定要封嚴，防止陽性標本的液體蒸發，產生周邊現象從而導致“花板”的出現。

    8.孵育時間過長，增加了固相載體吸附非特異性蛋白的可能性，也會造成“花板”。因此，除把握孵育時間外，在加樣過程中也應嚴格控制時間，標本較多時可分批操作。

    9.手工洗板時應注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出，連成整體液面后產生“花板”。

    10.用洗板機洗板時應防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現象而導致“花板”的出現。

    11.洗液的溫度也會影響洗板的干凈程度，尤其是冬天溫度過低時容易出現“花板”問題。

    12.洗液要注滿孔，孔壁洗滌不干凈也易造成“花板”現象。

    13.洗液要盡量新鮮配制，放置時間過長易產生絮狀物或渾濁，造成堵孔或花板。

    14.有些廠家的試劑顯色液不穩定，使用前容易變藍，如在實驗前不仔細檢查，很容易導致“花板”現象的發生，這也提醒實驗者應使用新鮮的顯色液，保證實驗的準確性。

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