ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線如何擬合？

許多試劑檢測都涉及到標(biāo)準(zhǔn)曲線的問題，標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結(jié)果，甚至是關(guān)系到實驗的成敗，那么ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線如何擬合？？

一般情況按照說明書推薦方法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線可以由酶標(biāo)儀附帶軟件自動生成，也可手動制作。標(biāo)準(zhǔn)曲線呈“S”形曲線，兩端趨于水平，中間趨于線性，中間部分為較佳的檢測范圍。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品的量超過與包被抗體結(jié)合的量，此時標(biāo)準(zhǔn)品已飽和，再增加標(biāo)準(zhǔn)品的量，其OD值不再變化，故當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品達到一定濃度后，曲線就趨于水平。一般廠商給出的濃度范圍落在中間線性范圍，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以測出樣本的濃度。按照科學(xué)分析方法，如果存在“奇異點”或者“污點”，直接采用線性分析不是很好，要對擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線的幾個點進行取舍，同時也可改用雙對數(shù)直線擬合或者四因素曲線擬合。

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo))，OD值為橫坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo))，在對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。


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